Biomics CRISPRsgRNA设计程序.pdf

CRISPR （ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）RNA，是最近几年才发现的原核生物中的调控RNA，用以抵御病毒和质粒入侵。在II型CRISPR系统中，CRISPR RNA（crRNA）与转录激活crRNA（Trans-activating crRNA, tracrRNA）退火形成的复合物能特异识别基因组序列，引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂（double-strand breaks, DSBs）。CRISPR-Cas系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种生物，包括人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。多个科研小组的研究都显示，与锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活样效应核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases, TALEN）相比较，CRISPR-Cas系统介导的基因组靶向实验在真核细胞中具有相似甚至更高的效率。

Biomics公司专注于RNA基因调控多年，最新推出基因组编辑工具CRISPR/Cas9专家系统，该系统灵活简单、可以对特定基因组位点进行切割置换，特异性高、细胞毒性低。CRISPR/Cas9系统可广泛应用于基因组工程，如基因抑制，基因敲除，基因敲入，基因修复等。CRISPR-Cas9体系的RNA-DNA识别机制为基因组工程研究提供了一项简便而强大的工具。其最重要的优势是Cas9蛋白可在多个不同的gRNA的引导下同时靶向多个基因组位点，起到多靶点调控的作用。

l          CRISPR与RNAi的区别

目前已经广泛应用的RNAi技术的靶标是mRNA，而CRISPR通过RNA识别DNA序列然后再改变DNA序列，是可以遗传的。由于编码mRNA的DNA序列只占总DNA的极少部分，因此靶向DNA序列的CRISPR的靶标要比RNAi广得多，更有可能筛选出针对某DNA序列的特异CRISPR靶标。

作为一种新的基因编辑技术，CRISPR/Cas9有以下特点和优势：

1、操作简单，靶向精确性更高。

sgRNA靶向序列和基因组序列必须完全匹配，Cas9才会对DNA进行剪切。编码sgRNA的序列不超过100bp，因此比构建TALENs和ZENs更简单方便，用于CRISPR的sgRNA识别序列仅需20个核苷酸。

2、CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰，其基因修饰可遗传。

3、基因修饰率高，基因调控方式多样，例如敲除、插入、抑制、激活等

4、可实现对靶基因多个位点同时敲除。

5、无物种限制。

6、实验周期短，最快仅需2个月，节省大量时间和成本。

CAS9 transcriptional activators for target specificity screening and paired nickases for cooperative genome engineering.pdfCRISPR-Mediated Modular RNA-Guided Regulation of Transcription in Eukaryotes.pdfGenetic Screens in Human Cells Using the CRISPRCas9 SystemScience-2013-Wang-science.1246981.pdfGenome editing with RNA-guided Cas9 nuclease in Zebrafish embryos.pdfGenome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human CellsScience-2013-Shalem-science.1247005.pdf